Paket Silika Gel Sebagai Penyimpanan dan Pengiriman Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, dan Haemophilus influenzae

Paket Silika Gel Sebagai Penyimpanan dan Pengiriman Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, dan Haemophilus influenzae

Silika Gel - Pengawetan dan penyimpanan isolat Seringkali isolat perlu diperiksa ulang atau dikarakterisasi lebih lanjut pada saat kultur awalnya diperoleh dan diuji. Jika isolat perlu dikirim ke laboratorium rujukan nasional untuk konfirmasi identitas dan/atau pengujian lebih lanjut, isolat harus disimpan dengan benar sebelum pengepakan dan pengiriman. Pemilihan metode penyimpanan tergantung pada lamanya organisme disimpan dan peralatan serta fasilitas laboratorium yang tersedia. 

Isolat yang akan disiapkan untuk penyimpanan jangka pendek atau jangka panjang harus dikonfirmasi sebagai kultur murni sebelum melanjutkan dengan salah satu dari metodologi ini. Kultur segar (yaitu, pertumbuhan 18-24 jam) harus selalu digunakan untuk penyiapan isolat yang akan disimpan.N. meningitidis, S. pneumoniae, dan H. influenzae adalah bakteri yang rapuh dan perawatan harus dilakukan untuk mengawetkan dan mengangkutnya dalam kondisi yang paling ideal. Teknik aseptik harus digunakan setiap saat selama penyiapan isolat untuk penyimpanan dan/atau pengangkutan untuk menghindari kontaminasi.

Penyimpanan jangka pendek N. meningitidis, S. pneumoniae, dan H. influenzae hanya dapat bertahan hidup selama 3-4 hari pada blood agar plate (BAP) dan/atau chocolate agar plate (CAP) dan tidak bertahan lama dalam kaldu; maka perlunya metode penyimpanan jangka pendek dan jangka panjang yang efektif dan praktis. Metode penyimpanan jangka pendek sesuai untuk isolat bakteri yang hanya perlu disimpan selama beberapa hari hingga beberapa minggu dalam satu waktu. Metode ini termasuk media Dorset Transport, agar miring coklat, dan paket gel silika.

Media Transportasi Dorset

Media Dorset Transport dapat digunakan untuk penyimpanan N. meningitidis, S. pneumoniae, dan H. influenzae pada suhu kamar (25oC) (1). Pada media Dorset Transport, N. meningitidis dan H. influenzae dapat disimpan selama kurang lebih 3 minggu, sedangkan S. pneumoniae dapat disimpan selama kurang lebih 6 minggu. Petunjuk untuk persiapan media Dorset Transport termasuk dalam Lampiran. Media Dorset Transport biasanya diproduksi sebagai kemiringan 4 ml dalam tabung tutup ulir 7 ml. Ini harus disimpan pada suhu 4 ° C saat tidak digunakan dan dihangatkan hingga suhu kamar (25 ° C) sebelum digunakan.

Tumbuhkan isolat murni untuk disimpan selama 18-24 jam pada BAP atau CAP pada 35-37°C dengan ~5% CO2 (atau dalam toples lilin).

Labeli kemiringan Dorset Transport dengan ID Lab dan tanggal.

Gunakan loop plastik sekali pakai untuk mengumpulkan beberapa koloni pertumbuhan semalam pada BAP atau CAP dan menyuntik kemiringan Dorset Transport.

Inkubasi semalaman pada suhu 37°C dalam 5% CO2 kemudian simpan Dorset Transport miring pada suhu kamar (25°C).

Jika media Dorset Transport tidak siap atau tidak digunakan oleh laboratorium, penyimpanan jangka pendek N. meningitidis, S. pneumoniae, dan H. influenzae dapat dilakukan pada agar coklat miring hingga 1 minggu. Petunjuk untuk persiapan agar miring coklat tercakup dalam Lampiran. Cokelat agar miring biasanya diproduksi sebagai kemiringan 4 ml dalam tabung tutup ulir 7 ml. Mereka harus disimpan pada suhu 4 ° C saat tidak digunakan dan dihangatkan hingga suhu kamar (25 ° C) sebelum digunakan.

Tumbuhkan isolat murni untuk disimpan selama 18-24 jam pada BAP atau CAP pada 35-37°C dengan ~5% CO2 (atau dalam toples lilin).

Beri label miring agar coklat dengan ID Lab dan tanggal.

Gunakan loop plastik sekali pakai untuk mengumpulkan beberapa koloni dari pertumbuhan semalam pada BAP atau CAP dan menginokulasi miring agar coklat.

Inkubasi kemiringan selama 18-24 jam pada 35-37°C dengan ~5% CO2 (atau dalam toples lilin).

Simpan kemiringan pada suhu kamar (25 ° C).

Untuk N. meningitidis, tutup ulir padat harus dilonggarkan selama penyimpanan tetapi tutup ulir membran permeabel (yang memungkinkan pertukaran gas dan tersedia secara komersial) harus digunakan bila memungkinkan. Overlay kaldu kedelai trypticase (TSB) juga dapat membantu dan dapat meningkatkan viabilitas. N. meningitidis miring tidak boleh didinginkan.

Viabilitas paling baik untuk S. pneumoniae dan H. influenzae jika kemiringan dipertahankan pada 4°C dengan tutup yang dikencangkan untuk menghindari pengeringan setelah inkubasi.

Paket gel silika

N. meningitidis, S. pneumoniae, dan H. influenzae juga dapat disimpan jangka pendek pada swab yang disimpan dalam paket gel silika, yang biasanya berupa kantong foil 1,5 g, dengan gel putih 75% dan gel biru 25% (gel biru adalah ditambahkan untuk mendeteksi kelembaban). Isolat dapat bertahan sekitar 2 minggu pada suhu 4°C dan mungkin sedikit lebih pendek pada suhu kamar (25°C). Paket-paket tersebut tidak mahal dan mudah digunakan (Gambar 1), tetapi tidak sering tersedia dari produsen komersial. Paket silika gel dapat disimpan pada suhu kamar (25 °C) saat tidak digunakan.

Tumbuhkan isolat murni untuk disimpan selama 18-24 jam pada BAP atau CAP pada 35-37°C dengan ~5% CO2 (atau dalam toples lilin).

Beri label paket gel silika dengan ID Lab.

Buka paket gel silika di dekat penutup perekat dengan gunting steril.

Periksa isi paket. Gel biru dan putih harus terlihat. Jika hanya gel putih yang terlihat, itu menunjukkan bahwa uap air dimasukkan ke dalam paket gel silika dan paket tersebut tidak boleh digunakan.

Kumpulkan pertumbuhan biakan murni semalaman dari BAP atau CAP dengan kapas poliester steril tunggal.

Jangan gunakan cotton bud karena kapas memiliki efek bakteriostatik yang akan menghambat pertumbuhan bakteri.

Tempatkan selotip tambahan di sekitar batang swab dan sudut terlipat untuk mengamankan swab dan menyegel paket.

Penyimpanan jangka panjang Penyimpanan isolat bakteri jangka panjang paling baik dilakukan dengan pembekuan atau liofilisasi (pengeringan beku). Pembekuan adalah metode penyimpanan yang paling nyaman untuk isolat yang sering dipulihkan karena kultur tidak perlu mencair sepenuhnya setiap kali dikeluarkan dari penyimpanan beku. Bakteri terliofilisasi dapat disimpan dalam waktu lama pada suhu 4°C atau -20°C dan dapat diangkut tanpa pendinginan. 

Namun, peralatan yang diperlukan untuk prosedur ini mahal dan tidak semua laboratorium memiliki kemampuan untuk liofilisasi isolat. Laboratorium referensi yang memilih untuk liofilisasi bakteri harus selalu mempertahankan sediaan beku di samping jumlah yang lebih besar dari galur terliofilisasi karena beberapa sediaan terliofilisasi mungkin tidak dapat bertahan hidup pada rekonstitusi. Kultur bakteri dapat disimpan dalam keadaan beku atau diliofilisasi dalam berbagai media penyimpanan yang diformulasikan untuk tujuan tersebut. 

Penyimpanan beku Susu skim dengan gliserol, darah domba, kuda, atau kelinci yang telah didefibrinasi, atau media Greaves digunakan untuk pembekuan. Petunjuk untuk mempersiapkan media ini tercantum dalam Lampiran. Darah manusia tidak boleh digunakan karena masalah keamanan (misalnya, penularan HIV dan hepatitis) dan kemungkinan penghambatan pertumbuhan isolat yang dihasilkan dari antibodi atau sisa antibiotik. Ampul kaca atau vial untuk pembekuan dalam nitrogen cair tidak boleh digunakan karena dapat meledak saat dikeluarkan dari freezer.

Tumbuhkan isolat murni untuk disimpan selama 18-24 jam pada BAP atau CAP pada 35-37°C dengan ~5% CO2 (atau dalam toples lilin).

Beri label tabung penyimpanan dengan ID Lab dan tanggal.

Gunakan pipet Pasteur steril untuk menambahkan 1 ml media penyimpanan steril yang tercampur rata ke dalam kriovial tutup ulir berukuran 2 ml.

Gunakan swab berujung poliester steril untuk memanen semua pertumbuhan semalam murni dari BAP atau CAP dan inokulasi media penyimpanan dengan memutar swab untuk melepaskan organisme.

Jangan gunakan cotton bud karena kapas memiliki efek bakteriostatik yang akan menghambat pertumbuhan bakteri.

Peras kelebihan media dari swab dengan memutarnya ke sisi cryovial sebelum menariknya dengan hati-hati. Buang swab dalam desinfektan.

Jika memungkinkan, bekukan suspensi dengan cepat dalam bak berisi alkohol 95% dan pelet es kering.

Tempatkan cryovial dalam freezer -70 °C atau freezer nitrogen cair (-120 °C). Sebuah freezer -20 ° C dapat digunakan, tetapi beberapa kehilangan viabilitas dapat diharapkan.

Freezer dengan siklus pencairan otomatis tidak boleh digunakan untuk laboratorium.

Liofilisasi

Beberapa laboratorium mungkin memiliki fasilitas liofilisasi. Media berbasis serum, susu skim, atau media polivinilpirolidon (PVP) umumnya digunakan untuk liofilisasi.

Tumbuhkan isolat murni untuk disimpan selama 18-24 jam pada BAP atau CAP pada 35-37°C dengan ~5% CO2 (atau dalam toples lilin).

Labeli tabung penyimpanan dan/atau vial liofilisasi dengan ID Lab dan tanggalnya.

Gunakan pipet Pasteur steril untuk menambahkan 1-2 ml media liofilisasi steril yang telah tercampur rata ke dalam kriovial tutup ulir berukuran 2 ml.

Gunakan swab berujung poliester steril untuk memanen semua pertumbuhan semalam murni dari BAP atau CAP dan suspensikan ke dalam 1-2 ml media liofilisasi steril dengan memutar swab untuk melepaskan organisme.

Jangan gunakan cotton bud karena kapas memiliki efek bakteriostatik yang akan menghambat pertumbuhan bakteri.

Peras kelebihan media dari swab dengan memutarnya ke sisi cryovial sebelum menariknya dengan hati-hati. Buang swab dalam desinfektan.

Tempatkan kira-kira 0,5 ml suspensi sel ke dalam ampul steril atau vial liofilisasi.

Beberapa botol dapat dibuat dari satu piring, jika diinginkan.

Sterilitas harus dijaga setiap saat selama persiapan vial.

Bekukan cangkang suspensi sel pada dinding vial liofilisasi. Ini dilakukan dengan menggunakan salah satu dari dua metode berikut:

Simpan vial liofilisasi pada suhu -70 °C sampai tepat sebelum suspensi sel ditambahkan. Tambahkan suspensi sel dan putar botol dengan cepat untuk membekukan suspensi ke dinding. Kembalikan vial ke dalam freezer -70 °C hingga siap untuk dipasang ke lyophilizer.

Sebagai alternatif, jika freezer -70°C tidak tersedia, siapkan campuran alkohol (95% etanol) dan es kering. Tambahkan suspensi sel dan putar botol liofilisasi dengan cepat pada sudut 45-60 ° dalam campuran alkohol dan es kering.

Pasang vial ke liofilisasi dan ikuti instruksi pabrik untuk liofilisasi karena jenis peralatan mungkin sedikit berbeda untuk setiap instrumen.

Waktu liofilisasi akan tergantung pada jumlah botol yang diliofilisasi dan kapasitas instrumen. Pada mesin rata-rata, dibutuhkan 4-5 jam untuk benar-benar mengeringkan 10-20 botol kecil.

Setelah proses selesai, tutup vial menggunakan sumber panas atau mekanisme penutup saat masih terpasang pada lyophilizer dan di bawah vakum. Botol dapat disimpan pada suhu 4°C atau -20°C setelah disegel.

Pemulihan isolat N. meningitidis, S. pneumoniae, dan H. influenzae Baik memulihkan isolat dari penyimpanan jangka pendek atau jangka panjang, pastikan untuk memberi label pada semua cawan agar dengan ID Lab dan tanggal yang sesuai menggunakan spidol permanen. Gunakan media agar yang sesuai untuk setiap organisme sebagaimana ditentukan dalam Bab 6: Kultur Primer dan Identifikasi Dugaan.

Media Dorset Transport dan agar coklat miring

Gunakan loop 10 l steril untuk menghilangkan loop penuh pertumbuhan dari Dorset Transport atau agar coklat miring dan coretan untuk isolasi pada BAP atau CAP.

Inkubasi piring selama 18-24 jam pada 35-37°C dengan ~5% CO2 (atau dalam toples lilin) ​​dan amati pertumbuhannya

Jika tidak ada pertumbuhan yang diamati di piring, ulangi langkah di atas dengan loop penuh pertumbuhan lain dari Dorset Transport atau agar coklat miring dan coretan untuk isolasi pada BAP atau CAP.

Paket gel silika

Keluarkan swab dari kemasan gel silika dan goreskan garis vertikal ke bawah 1/3 bagian tengah BAP atau CAP, lalu coret 1/3 pelat menggunakan swab.

Pastikan bahwa seluruh area permukaan yang berisi biakan bersentuhan dengan pelat.

Setelah menggores 1/3 dari piring, tempatkan swab di sekitar 1 ml kaldu infus jantung otak (BHI) dan inkubasi kaldu selama 18-24 jam pada 35-37°C dengan ~5% CO2 (atau dalam lilin- stoples).

Lukis sisa 2/3 pelat untuk isolasi dengan loop 10 l.

Inkubasi piring selama 18-24 jam pada 35-37°C dengan ~5% CO2 (atau dalam toples lilin) ​​dan amati pertumbuhannya.

Jika organisme tidak dapat hidup setelah inkubasi semalam, pipet 10 l kaldu ke piring baru dan coret untuk isolasi. Inkubasi plate selama 18-24 jam pada suhu 35-37°C dengan ~5% CO2 dan periksa pertumbuhannya pada hari berikutnya.

Isolat beku

Biarkan isolat beku mencair pada suhu kamar, cukup sehingga 10 l media pembekuan dapat dikeluarkan dari atas.

Kembalikan stok beku ke freezer segera setelah dikumpulkan. Setelah benar-benar dicairkan, kultur beku akan mulai kehilangan viabilitasnya.

Tempatkan 10 l media pembekuan ke BAP atau CAP dan coret untuk isolasi.

Inkubasi piring selama 18-24 jam pada 35-37°C dengan ~5% CO2 (atau dalam toples lilin) ​​dan amati pertumbuhannya.

Jika tidak ada pertumbuhan yang diamati di piring, ulangi langkah di atas dengan 10 l kultur beku lainnya.

Isolat yang ditumbuhkan dari kultur beku harus disubkultur setidaknya sekali sebelum digunakan dalam pengujian.

LAYANAN ADY WATER

Jual silica gel minimal pembelian 1 kg. Ukuran sachet silica gel yang dijual 1 gram, 2 gram, 5 gram, 10 gram, 25 gram, 50 gram, 100 gram, 250 gram, 500 gram, 1 kilogram. Jual silica gel curah per karung 25 kilogram. Sudah suplai silica gel untuk kebutuhan bandara, industri sepatu, makanan (FOOD GRADE), gas separasi / kromatografi kolom, aquarium, kebutuhan pribadi, dll

Nomor WA Sales Yang Mudah Dihubungi

Senang dapat membantu Anda, Semoga kami dapat segera menyelesaikan masalah air yang sedang Anda hadapi. Terimakasih

1. Ghani 0821 2742 4060

2. Yanuar 0812 2165 4304

3. Rusmana 0821 2742 3050

4. Fajri 0821 4000 2080

5. Kartiko 0812 2445 1004

6. Andri 0812 1121 7411

Alamat kantor/gudang Ady Water yang bisa dikunjungi langsung. 

Silahkan Bapak/Ibu mengunjungi alamat kantor/gudang kami. Kami akan melayani Anda dengan senang hati dan semoga dapat membantu masalah air yang sedang Anda hadapi. 

1. Alamat Bandung:

Jalan Mande Raya No. 26, RT/RW 01/02 Cikadut-Cicaheum, Bandung 40194

2. Alamat Jakarta Timur

Jalan Tanah Merdeka No. 80B, RT.15/RW.5 Rambutan, Ciracas, Jakarta Timur 13830

3. Alamat Jakarta Barat

Jalan Kemanggisan Pulo 1, No. 4, RT/RW 01/08, Kelurahan Pal Merah, Kecamatan Pal Merah, Jakarta Barat, 11480

Katalog Ady Water

http://bit.ly/KatalogAdyWater